凝膠成像儀是一種常用于蛋白質(zhì)和核酸凝膠電泳實驗中的儀器,用于觀察和記錄凝膠中的條帶。凝膠成像儀的使用方法如下:
本實驗的目的是熟悉和掌握凝膠成像儀的使用步驟,正確觀察和記錄凝膠電泳結(jié)果。
實驗步驟:
1. 準(zhǔn)備工作
- 保證工作環(huán)境整潔干凈,無塵。
- 檢查電源線和儀器連接是否牢固。
- 打開凝膠成像儀電源開關(guān)。
2. 凝膠樣品裝載
- 按照實驗需要,將SDS凝膠放置在凝膠成像儀上的樣品臺上。
- 將選擇的熒光染料溶液均勻地加到凝膠上,確保每個樣品得到足夠的染色液體覆蓋。
- 輕輕搖動凝膠,使熒光染料均勻地滲透到凝膠中。
3. 調(diào)整成像參數(shù)
- 打開成像軟件,將凝膠成像儀與電腦連接。
- 在軟件界面上選擇相應(yīng)的熒光通道,以保證成像時熒光信號可以被準(zhǔn)確捕捉。
- 調(diào)整成像參數(shù),如曝光時間、增益等,以確保觀察到適當(dāng)?shù)男盘枏?qiáng)度。
4. 開始成像
- 單擊軟件界面上的“開始"按鈕,儀器開始進(jìn)行成像。
- 成像過程中,盡量避免移動凝膠,以免影響成像的清晰度。
- 確保凝膠成像儀在光源下照明均勻,以獲得高質(zhì)量的成像結(jié)果。
5. 文件保存和分析
- 成像完成后,選擇保存成像文件的位置和格式。
- 使用分析軟件查看和分析成像結(jié)果,如調(diào)整亮度、對比度、標(biāo)定分子量等。
6. 儀器關(guān)閉
- 完成實驗后,關(guān)閉凝膠成像儀電源開關(guān)。
- 清潔工作臺和凝膠成像儀,確保儀器表面干凈無塵。
注意事項:
- 在操作凝膠成像儀之前,務(wù)必確認(rèn)已理解并熟悉使用說明書和安全規(guī)程。
- 當(dāng)處理凝膠時,佩戴實驗手套,以防止在樣品上留下指紋等雜質(zhì)。
- 操作結(jié)束后,將凝膠安全處置,避免對環(huán)境造成污染。
- 避免在凝膠成像儀工作時,讓強(qiáng)光直接照射到眼睛。
-蛋白質(zhì)電泳時使用SDS預(yù)制膠可以縮短電泳時間,注意部分電泳儀如VE-586垂直電泳槽僅能使用預(yù)制膠進(jìn)行實驗,不支持自配膠。
-做發(fā)光實驗時,為保證凝膠成像的背景清晰,可以使用高敏或超敏ECL發(fā)光液。
凝膠成像儀是一種重要的實驗儀器,能夠?qū)δz電泳結(jié)果進(jìn)行快速高質(zhì)量的成像和記錄。正確使用凝膠成像儀,掌握操作步驟,既能提高實驗效率,又能保證結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
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