蛋白質(zhì)電泳常用試劑配制方法如下:
一、3×SDS-PAGE loading buffer的配制
3×SDS-PAGE loading buffer | 10ml |
1M Tris-Hcl (PH 6.8) | 1.5ml |
SDS | 0.6g |
BPB(溴酚藍(lán)) | 30mg |
甘油(丙三醇) | 3ml |
去離子水 | 5.5ml |
1、將除BPB以外的藥品溶解。SDS常溫下很難溶解,可以在37℃水浴溶解。溶解后,再加入BPB,進(jìn)行溶解;
2、把溶好的buffer分裝到1.5ml的離心管中,1ml/管,常溫放置;
3、使用前,每管加入30µL巰基乙醇。
注意事項:巰基乙醇為危險品,加入的過程在通風(fēng)櫥中完成,并且?guī)Ш檬痔住?/p>
二、10×PBS的配制
0.1M PBS(10×PBS) | 1L |
NaH2PO4.2H2O | 2.83g |
Nacl | 85g |
Na2HPO4.12H2O | 28.98g |
1、用去離子水將以上藥品進(jìn)行溶解;(溶解的非常慢,可能需要過夜)
2、調(diào)PH值到7.2,用0.4µm的濾膜過濾。常溫保存;
3、工作時用的是1×PBS。
三、1.5M Tris-Hcl (PH 8.8) 的配制
1.5M Tris-Hcl | 250ml |
Tris | 45.425g |
1、用200ml去離子水將Tris溶解。
2、用濃鹽酸調(diào)PH值到8.8。
3、調(diào)好PH的Tris-Hcl定容到250ml。
4、0.4µm的濾膜過濾,常溫保存。
注意事項:Tris的緩沖能力很強(qiáng),調(diào)PH值時,費些時間,但不要調(diào)過。
四、1M Tris-Hcl (PH 6.8) 的配制
1M Tris-Hcl | 250ml |
Tris | 30.275g |
1、用200ml去離子水將Tris溶解;
2、用濃鹽酸調(diào)PH值到6.8;
3、調(diào)好PH的Tris-Hcl定容到250ml;
4、0.4µm的濾膜過濾,常溫保存。
五、30%丙烯酰胺的配制
30%丙烯酰胺 | 250ml |
丙烯酰胺 | 72.5 ml |
BIS甲叉丙烯酰胺 | 2.5 ml |
1、把藥品用去離子水溶解后定容到250ml;
2、用濾紙過濾,放在棕色瓶子中,4℃保存。
注意事項:兩種藥品有毒性,配制過程要帶手套和口罩。
六、10%SDS的配制
1.1g SDS加入10ml去離子水進(jìn)行溶解;
2.分裝到1.5ml離心管中,-20℃保存。
七、10%過硫酸銨的配制
1.1g 過硫酸銨加入10ml去離子水進(jìn)行溶解。
2.分裝到1.5ml離心管中,-20℃保存。
八、5×SDS-PAGE電泳緩沖液的配制
5×SDS-PAGE電泳緩沖液 | 1L |
Tris | 15.1g |
Glycine(甘氨酸) | 94g |
SDS | 5g |
將以上藥品用去離子水溶解后定容到1L,常溫保存。工作時用的是1×SDS-PAGE電泳緩沖液。
九、考馬斯亮藍(lán)R-250染色液的配制
1、往1g考馬斯亮藍(lán)R-250中加入250ml異丙醇,在磁力攪拌器上攪拌六小時以上;
2、加入650ml去離子水,磁力攪拌器攪拌過夜;
3、再加入100ml冰醋酸進(jìn)行溶解,磁力攪拌器攪拌;
4、在通風(fēng)櫥內(nèi)用濾紙進(jìn)行過濾。常溫保存。染色液只能反復(fù)用兩次。
注意事項:在磁力攪拌器上攪拌時,要把容器封口。
十、脫色液的配制
脫色液 | 1L |
醋酸(冰乙酸) | 100ml |
乙醇(無水乙醇) | 50ml |
去離子水 | 850ml |
常溫保存。
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