購買細胞收到細胞前,應(yīng)做哪些準(zhǔn)備工作?
購買細胞應(yīng)具有一定細胞培養(yǎng)知識與經(jīng)驗,并具備基本實驗設(shè)備,如細胞培養(yǎng)實驗室、超凈工作臺、CO2培養(yǎng)箱,倒置顯微鏡等;還應(yīng)準(zhǔn)備好相應(yīng)的細胞無菌培養(yǎng)基、血清、雙抗、細胞培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板、移液管等。
購買的細胞收到細胞后,應(yīng)該怎么操作?
1. 觀察細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請及時與技術(shù)支持聯(lián)系;
2. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng),隔天再取出進行觀察;
3. 仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關(guān)信息,如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等;
4. 可將培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管中,備用;細胞傳代時,可以將該培養(yǎng)基按照一定比例和自備的培養(yǎng)基混合使用,讓細胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件;
5. 確認(rèn)細胞狀態(tài)良好后,應(yīng)及時將細胞凍存,再進行后續(xù)的實驗,避免后期實驗失誤可能發(fā)生細胞污染或死亡而導(dǎo)致的細胞丟失;
6. 建議收到細胞后前3天,100X、200X、400X各拍3-5張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和廠家技術(shù)支持溝通交流。
細胞發(fā)貨標(biāo)準(zhǔn)是什么?
細胞發(fā)貨時,保證細胞處于生長對數(shù)期;貼壁細胞達到75%以上匯合度,約5×10^5cells/T25細胞培養(yǎng)瓶;傳代次數(shù)5代以內(nèi);凍存細胞發(fā)2個凍存管;無微生物污染。
細胞一般是以什么形式運輸?
細胞通常用T25細胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng),發(fā)貨時用相應(yīng)的培養(yǎng)基灌滿細胞瓶,密封瓶口后放在包裝盒內(nèi),以快遞的方式發(fā)送給客戶。天氣變冷,溫度低于4℃時,以凍存細胞,干冰運輸?shù)姆绞桨l(fā)貨。
細胞培養(yǎng)過程中,是否可以更換培養(yǎng)基?
不建議替換。每株細胞均有其特定使用且已適應(yīng)的培養(yǎng)基,而且經(jīng)過一定時間馴化后,若驟然改變培養(yǎng)條件,細胞有可能出現(xiàn)不適應(yīng),表現(xiàn)出生長緩慢、顆粒增多、死細胞出現(xiàn),造成細胞無法存活;也有些細胞在更換培養(yǎng)基后也能正常的生長,細胞狀態(tài)也能維持,但問題會出現(xiàn)在凍存后期的復(fù)蘇過程,有可能細胞沒法復(fù)蘇,所以不建議隨便更換培養(yǎng)基。
購買細胞后如何選擇細胞培養(yǎng)瓶?
一般,生長速度慢的細胞如果想要更漂亮的細胞狀態(tài),那么采用塑料瓶會比玻璃瓶的效果好;生長速度快的細胞,用玻璃瓶培養(yǎng)的效果會更好。因此,對于同一種細胞,在其生長速度慢的時候(比如細胞剛復(fù)蘇時或者原代培養(yǎng)),塑料瓶會好一點;而在其生長旺盛的時候,玻璃瓶則相對會好一點。
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